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      磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS),pH7.2-7.4,1X,無菌,不含Ca2+/Mg2+
      2020年7月17日

      Bradford蛋白定量試劑盒

      100.00


      貨號: RBP202-200. 分類: , ,
      描述

      Bradford蛋白定量試劑盒

      貨號                                   RBP202-200

      規格                                   200t

      無菌狀態                             非無菌

      應用級別                             生物試劑級別

      生產環境最低要求                 開放車間

      4C2T體系認證級別               C3T1

      儲存及運輸條件                    0-4℃儲存及運輸

      效期                                  遵儲存及運輸條件穩定12個月

       

      簡介                        

             Bradford蛋白濃度測定試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)是根據最常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一Bradford法研制而成,實現了蛋白濃度測定的快速,穩定和高靈敏度。考馬斯亮藍在酸性游離狀態下呈棕紅色,當它與蛋白質結合后變為藍色,蛋白-染料結合物最大吸收峰為595nm。在一定的濃度范圍內,蛋白質-染料復合物在波長為595nm處的吸光度與蛋白質含量成正比,通過測定595nm處光吸光度可知與其結合蛋白質的量。蛋白質和考馬斯亮藍結合,在2-5min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速,靈敏度比Lowry法還高4倍。

            本產品同時適用試管法和微孔板法,可檢測常規濃度范圍(1001500ug/ml)和微量濃度范圍(1-25ug/ml)的蛋白樣品濃度。本試劑盒可用于標準試管法130次,微量試管法200次,標準微孔板法660次,微量微孔板法1300次。

       

      產品包裝                   

      Buffer A                                    250ml

      Buffer B (2mg/ml BSA)        5mL

      使用方法                    

      標準品的制備

      1. 牛血清白蛋白標準品稀釋液的制備(100-1500 μg/ml)

      管號

      加入稀釋液體積

      Buffer B

      終濃度

      A

      不稀釋

       

      2000μg/ml

      B

      125μl

      375μl (從A管取)

      1500μg/ml

      C

      250μl

      250μl (從A管取)

      1000μg/ml

      D

      175μl

      175μl (從B管取)

      750μg/ml

      E

      325μl

      325μl (從C管取)

      500μg/ml

      F

      325μl

      325μl (從C管取)

      250μg/ml

      G

      325μl

      325μl (從C管取)

      125μg/ml

      H

      400μl

      100μl (從G管取)

      25μg/ml

      I

      400μl

      0

      0μg/ml (空白孔)

      1. 牛血清白蛋白標準品稀釋液的制備(1-25 μg/ml)

      管號

      加入稀釋液體積

      Buffer B

      終濃度

      A

      2100μl

      300μl(2mg/ml)

      25μg/ml

      B

      400μl

      1600μl (2mg/ml)

      20μg/ml

      C

      500μl

      1500μl (從B管取)

      15μg/ml

      D

      500μl

      1000μl(從C管取)

      10μg/ml

      E

      750μl

      750μl(從D管取)

      5μg/ml

      F

      750μl

      750μl(從E管取)

      2.5μg/ml

      G

      2000μl

      0

      0 μg/ml(空白孔)

      試管法

      A.標準試管測定法(檢測范圍:100-1,500 μg/ml)

      注:線性工作范圍BSA = 125-1000 μg/ml, IgG = 125-1500 μg/ml。

      1. 在各試管中分別加入50ul稀釋好的各個濃度標準品和待測樣品。
      2. 在上述試管中分別加入1.5ml Buffer A并充分混勻。
      3. 室溫下靜置孵育10分鐘。
      4. 設置分光光度計值于595nm,將儀器調零。然后檢測所有樣品的吸收

      值。

      1. 將所有標準品及待測樣品的數值減去空白孔的值,繪制標準曲線。

      B.微量試管測定法(檢測范圍:1-25 μg/ml)

      1. 在各試管中分別加入1ml稀釋好的各個濃度標準品和待測樣品。
      2. 在上述各試管中分別加入1ml Buffer A并充分混勻。
      3. 室溫下靜置孵育10分鐘。
      4. 設置分光光度計值于595nm,將儀器調零。然后檢測所有樣品的吸收

      值。

      1. 將所有標準品及待測樣品的數值減去空白孔的值,繪制標準曲線。

      微孔板法

      1. 標準微孔測定法(檢測范圍:100-1500ug/ml)
      2. 在微孔板相應孔中分別加入10ul稀釋好的各個濃度標準品和待測樣

      品。

      1. 在上述微孔中分別加入300ul Buffer A,振蕩器中振蕩30s充分混

      勻。

      1. 室溫下靜置孵育10分鐘。
      2. 設置酶標儀波長在595nm或者附近,讀板。
      3. 將所有標準品及待測樣品的數值減去空白孔的值,繪制標準曲線。

      D.微量微孔測定法(檢測范圍:1-25 μg/ml)

      1. 在微孔板相應孔中分別加入150ul稀釋好的各個濃度標準品和待測樣

      品。

      1. 在上述微孔中分別加入150ul Buffer A,振蕩器中振蕩30s充分混

      勻。

      1. 室溫下靜置孵育10分鐘。
      2. 設置酶標儀波長在595nm或者附近,讀板。
      3. 將所有標準品及待測樣品的數值減去空白孔的值,繪制標準曲線。

       

      注意事項                    

           1. 保持試管潔凈,取樣操作應準確無誤。

      1. 加入樣品后的試劑和工作液振蕩混合均勻后,靜置反應,此過程中勿

      再次劇烈晃動。

      1. 為了測試準確,反應完成后10min內測定光吸收,因為在這段時間內

      顏色是最穩定的。

      1. 由于操作、隨機或者系統誤差,會影響標準曲線的相關系數,可通過

      舍去某些可疑點或者縮減濃度區間后再構建標準曲線,提高您檢測結果

      的可靠性。

          5 .Bradford染色液含有刺激性或者腐蝕性化合物,操作時要戴乳膠手

      套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水

      或者生理鹽水沖洗。

      1. Bradford染色液中考馬斯亮藍易聚集成團,每次使用前請顛倒6-8次

      并且豎直抓住瓶口做水平劃圈動作,旋轉瓶中液體,幫助充分混勻,但

      不可以上下振蕩混勻。

      1. 低溫會降低 Bradford染色液的敏感度,因此每次使用前應該Brad

      ford染色液恢復到室溫。僅僅將需要的Bradford染色液復溫,可以減少

      復溫時間。倒出每次需要的 Bradford染色液回復到室溫,將原瓶放回冰

      箱。

      1. 標準品曲線配制時,如果吸量不準確或者加樣槍不精確會造成標準曲

      線相關系數減小,可根據需要使用倍比梯度稀釋的方法來配制,或者使

      用精確度高的加樣槍。

      1. 由于 Bradford法在蛋白濃度增高到一定時候,顏色反應并不成比例

      增加,因此得到的標準曲線只是在一定范圍內可以近似看成直線,每次

      應按照實際測得的標準曲線計算出大致精確的蛋白濃度。

      1. 需要酶標儀一臺,最佳檢測波長為595nm,也可以在570-610nm之間

      波長測定但會降低一些敏感度:并需96孔板。如果沒有酶標儀,也可以

      使用普通的分光光度計測定,但是測定蛋白濃度時,需根據測定吸光度

      的杯子的體積,按比例調整 Bradford染色液和樣品的體積。使用分光光

      度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減

      少。

      1. Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,

      樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受

      略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.125%, Triton X-100低于

      0.125%, Tween20低于0.06%可以考慮用超純水稀釋,透析除鹽,

      ACETONETCA沉淀蛋白后重溶于超純水等方法來消除于擾物質的影響。

      1. 為了您的安全和健康,請穿戴實驗服并戴一次性手套操作。